Использование по назначению

IHC p, f; Набор предназначен для иммуногистохимической детекции первичных антител от мышиных и кроличьих (не включены в данный набор) на формалин фиксированных парафиновых срезах ткани.  Реагенты, входящие в этот набор, идеально подходят для совместной работы.

Данный продукт может быть использован только авторизованными и компетентными специалистами. Клиническая интерпретация результатов любого исследования должна происходить с учетом истории болезни пациента и результатов других диагностических лабораторных исследований. Оценка должна проводиться квалифицированным патологоанатомом.

Резюме и пояснения

Набор ProTaqs® Essencial основан на методе LSAB (метод меченого стрептавидин-биотина).  Это чувствительная иммуногистохимическая система детекции.  Первичное антитело мыши или кролика связывается с меченным биотином вторичного антитела.  Стрептавидин-пероксидазы хрена связывается с этим комплексом, что приводит к цветной реакции на антигенных участках после нанесения хромогена.  Система предназначена для детекции первичных антител, полученных от мыши и кролика.

Принцип процедуры

Перед окрашиванием срезы ткани, фиксированные формалином, залитые парафином (FFPE), следует подвергнуть депарафинизации и гидратации с последующим восстановлением антигена (HIER или PIER) с использованием метода целевого извлечения, указанного во вкладыше к упаковке первичного антитела.  Блокирование неспецифического связывания с помощью пре-блокирующего раствора.  Рекомендуется использование готовых первичных антител.  При использовании концентратов антител оптимальное разведение следует определять в собственной системе пользователя.  Усилитель антител применяется для усиления сигнала первичного антитела. Биотинилированное вторичное антитело реагирует с первичным антителом, предоставленным пользователем.  Стрептавидин, меченный HRP, затем реагирует с биотинилированным вторичным антителом с образованием комплекса HRP-стрептавидин-биотин.  Ферментативная активация хромогена приводит к появлению видимого продукта реакции на участке антигена.  Для этого набора рекомендуется использовать хромоген DAB, который дает коричневый конечный продукт.  Каждый этап инкубируется в течение определенного времени и требует промежуточных этапов промывки рекомендованным промывочным буфером.  Затем образец может быть подвергнут контрастному окрашиванию гематоксилином, обеспечивающим голубое окрашивание ядер, а затем помещен в водную среду для закрепления.  См. Раздел 6 для получения рекомендаций по продукту.  Результаты интерпретируются с помощью светового микроскопа.

Предоставленные материалы

Следующие реагенты предназначены для проведения 150 тестов (при использовании 100 мкл на предметное стекло).

- Поливалентное вторичное антитело, связанное с биотином, 15 мл

- Стрептавидин-HRP, 15 мл

 - Пре-блок, 15 мл

Предупреждения и меры предосторожности

1. Применение только уполномоченным и квалифицированным персоналом.

2. Оценка риска для здоровья отсутствует, если продукт используется по назначению.

3. Продукт содержит азид натрия.  Азид натрия токсичен.  Концентрации, используемые в этом наборе, не классифицируются как токсичные.  Азид в этом наборе может реагировать со свинцом и медью в водопроводе и, таким образом, образовывать взрывоопасные азиды металлов.

4. Не используйте реагенты по истечении срока годности.

5. Не подвергайте комплект воздействию яркого света и избегайте использования инструмента при ярком солнечном свете.

6. Соблюдайте разумные меры предосторожности при обращении с реагентами.  Используйте защитную одежду и перчатки и избегайте контакта с кожей и глазами.

7. Все опасные материалы следует утилизировать в соответствии с инструкциями по утилизации опасных отходов.

8. Паспорт безопасности материалов предоставляется по запросу.

Подготовка образцов.

Набор можно использовать для срезов тканей FFPE.  Условия окрашивания основаны на образцах размером почти 2-5 мкм.  Секции необходимо закрепить и хорошо подготовить.  Рекомендуемый фиксатор ткани - формалин с нейтральным буферным раствором 10%.  Различные результаты могут быть получены в результате длительной фиксации или специальных процессов, таких как декальцификация препаратов костного мозга.  Предметные стекла должны быть однородными, а ткани должны плотно прилегать к предметным стеклам, чтобы ткани не упали.  Срезы следует окрашивать как можно скорее, так как антигенность срезов ткани со временем может снизиться.  Перед окрашиванием срезы FFPE необходимо депарафинизировать с помощью ProTaqs® Clear (или ксилола) и повторно гидратировать с помощью градиентной серии этанола.  Большинство срезов тканей требуют извлечения эпитопа, индуцированного нагреванием (HIER).  Рекомендуется окрашивать положительные и отрицательные контроли одновременно с неизвестными образцами.  Оптимальный протокол предварительной обработки должен быть определен в собственной системе пользователя.  Не допускайте высыхания образцов или срезов тканей.